TR101 宁波天润沙门氏菌属诊断血清60种

• 从冰箱取出诊断血清后，平衡至室温。

• 准备好所需的实验设备，如玻片、吸样枪、接种环等，以及经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。

菌群分析：

• 将经 18-24h 血平板上纯培养的待检菌，先用 O 多价 A-F 群血清进行凝集试验。若阳性，提示待检菌可能属于 A-F 群范围内；若不凝，再使用其他 O 抗血清进行凝集试验。

• 若与多价 O 抗血清不凝集，可能有以下 3 种情况：含有 Vi 抗原；A-FO 群之外的沙门菌；沙门氏菌属以外的细菌。可将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成 2 份，1 份不经处理为活菌液，另 1 份放 100°C 水浴中 30min 为加热菌液。然后分别取活菌与 Vi 抗血清，加热菌与 Vi 抗血清、A-F 多价 O 抗血清进行玻片凝集试验，并根据结果进行分析。

血清型分析：

• 第 1 相鞭毛抗原分析：菌群确定后，根据菌群分析结果，分别选用第 1 相鞭毛因子血清进行玻片凝集试验。

• 第 2 相鞭毛抗原分析：所用抗血清通常是复合因子血清。若为单相菌，结合菌群分析及生化反应结果判断血清型；如为双相菌，只分析出第 1 相鞭毛抗原，大多数也可结合菌群分析和生化结果判断血清型，必要时进一步探索第 2 相鞭毛抗原。若只分析出第 2 相鞭毛抗原，须进一步探索分析第 1 相抗原，可采用 “小内管” 法等进行诱导。

具体凝集试验操作：将经 18-24h 血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制备 2 麦氏单位的菌悬液。取诊断血清 20μL 于洁净玻片上，然后取 20μL 待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min 内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性。每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。

确定菌型：根据其生化反应和与 O 抗血清、Vi 抗血清、H 抗血清的凝集结果，对照沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表，确定沙门菌的菌型。